Isit la, nou etabli sCRAM (suboptimal protospacer adjacent motif (PAM) -medyatè CRISPR RNA ak Cas12a nuclease konbine avèk anplifikasyon rapid izotèmik multienzyme), yon platfòm dyagnostik rapid ak ekstraksyon-gratis ki detekte ASFV nan lespas 20 minit. sCRAM entegre yon etap rapid lage asid nikleyik (40 degre, 5 min) ak yon reyaksyon yon sèl-tib ki konbine anplifikasyon izotèmik multienzyme (MIRA) ak yon CRISPR ki pa pi bon nan PAM-medyatè.
Sistèm Cas12a (37 degre, 15 min), pèmèt enstriman -lekti vizyèl gratis atravè limyè UV oswa bann koule lateral (LFS). Evalyasyon 111 echantiyon simulation ak klinik (ki gen ladan san, plasma, ak prelèvman) revele yon konkordans 100% ak qPCR pou lekti UV ak 98.20% pou LFS.
lekti, ak tou de metòd montre espesifik 100%. Senplisite, vitès, ak adaptabilite jaden sCRAM souliye potansyèl li pou siveyans desantralize ASFV nan anviwònman resous-limite, ki ofri yon zouti pwisan pou kenbe epidemi.
Nan etid sa a, nou devlope sCRAM, yon platfòm deteksyon ASFV rapid ak -deplwaye sou teren ki entegre CRISPR/Cas12a ki pa pi bon PAM-medyatè ak anplifikasyon izotèmik miltienzym. Egzamen an reyalize yon sèl -kopi 1 kopi/uL sansiblite nan lespas 20 minit epi li pa montre okenn reyaktif kwa- ak gwo patojèn kochon. Validasyon klinik atravè echantiyon san, plasma, ak prelèvman demontre konkordans konplè ak qPCR lè l sèvi avèk lekti limyè UV ak presizyon 98.20% atravè bann koule lateral. Avèk operasyon senplifye, gwo sansiblite ak espesifik, ak entèpretasyon rezilta vizyèl, sCRAM ofri gwo potansyèl pou siveyans ASFV sou plas ak pi laj aplikasyon pou dyagnostik -swen.
