Staphylococcus haemolyticus se yon bakteri koagulase-negatif Gram-pozitif ki trè komen nan lopital yo. Nan dènye ane yo, te gen enkyetid ogmante akòz gwo risk pou yo nan lopital-akeri enfeksyon. Staphylococcus haemolyticus ka pli lwen lakòz enfeksyon po, menenjit, peritonit, e menm enfeksyon. Reta nan dyagnostik klinik ka mennen nan deteryorasyon nan kondisyon sante, se konsa dyagnostik rapid nan staphylococcus emolyticus se kle nan tretman egzak.
Gwoup rechèch Pwofesè Ji Tuo a nan Depatman Laboratwa Santral nan Lopital Lianyungang Dezyèm Pèp la pibliye yon atik "yon deteksyon rapid ak vizyèl nan Staphylococcus emolyticus nan echantiyon klinik ak MIRA-LFS" nan jounal la "Analytica Chimica Acta", ak yon faktè enpak nan 6.2.
Apèsi sou lekòl la nan etid la
Nan etid sa a, gwoup professeur Ji Tuo te etabli yon metòd pou deteksyon an nan staphylolyticus haemolyticus pa MIRA-LFS ki baze sou jèn MVAA, ak itilize milti-anzim tanperati a konstan rapid asid nikleyè anplifikasyon MIRA konbine avèk lateral koule tès LFS Tès yo reyalize rapid patojèn deteksyon. Eksperyans lan te fèt nan 37 degre ak rezilta yo te detekte nan 9 min ak yon sansiblite deteksyon nan 0. 147 CFU/reyaksyon. Metòd deteksyon MIRA-LFS la apwopriye pou deteksyon pwen fiks de staphylococcus emolyticus nan echantiyon klinik yo, e reyalize metòd idantifikasyon staphylococcus haemolyticus pa POCT, ki se yon gwo valè pou dyagnostik rapid ak tretman maladi nan zòn ki defavorize yo. Gwoup rechèch la te itilize MIRA-LFS, qPCR ak tradisyonèl metòd kilti bakteri yo analize 95 echantiyon klinik o aza, ak konfime aplikabilite nan klinik.
Metòd rechèch
Yon dyagram schematic nan tès la MIRA-LFS yo montre pi wo a. Nan etid sa a, AMPFuture Biotech a ADN konstan tanperati rapid anplifikasyon twous (koloidal Gold Tès teren teren) ak nikleyik asid deteksyon tès yo te itilize.
Longè a Jadendanfan nan jèn MVAA te 30-35 nukleotid, ak longè a nan pwodwi a anplifikasyon te 100-350 BP, ak yon total de 6 pè nan prime kandida yo te fèt. GDNA nan estanda staphylolytic staphylococcus tansyon yo te itilize pou analiz MIRA, prime kandida yo te fè tès depistaj, ak pwodwi yo anplifye yo te vizualiz pa 2% agarose jèl elèktroforèz.
(Pwodwi anplifikasyon yo ap parèt lè l sèvi avèk agarose jèl elèktroforèz)
Se ankèt la Lè sa a, ki fèt dapre sekans lan Jadendanfan pou pi devan (16 bp bak). Se fen a 5 'nan sondaj la ki make ak FITC ak fen a 3' ki make C3. Nukleotid pozisyon {{4} Se fen a 5 'nan Jadendanfan an ranvèse chwazi ki make ak biotin.
(Dyagram schematic de kwa-dimè ak sekans modifikasyon nan Jadendanfan-pwofonde konbinezon)
Anplis de sa, kondisyon yo reyaksyon pou deteksyon an nan MIRA-LFS pa Staphylococcus haemolyticus yo te optimisé. Tès yo fèt nan 37 degre nan 4-12 min nan 2 entèval min. Rezilta yo yo montre nan tan an reyaksyon 8 min, ak liy lan tès se vizib klèman. Anplis de sa, se tès la fèt soti nan 22-52 degre nan entèval 5 degre. 37-42 degre se tanperati ki pi apwopriye pou deteksyon MIRA-LFS. Se poutèt sa, tan an reyaksyon pi bon ak tanperati a nan metòd la Mira-LFS pou Staphylococcus emolyticus yo te 8 min ak 37 degre, respektivman. Ansanm ak lefèt ke se rezilta final la vizualiz pa LFS nan 1 min, tan an deteksyon total se 9 min.
(Optimize nan tan reyaksyon ak tanperati)
Rezilta eksperimantal yo
1. Verifikasyon sansiblite
Diferan konsantrasyon nan ADN jenomik (gDNA) jwenn nan dilution seri nan Staphylococcus haemolytica kilti (1 0^6-10^0 Cfu/ml) yo te teste pou miRA-LFS.
(Siyal pozitif nan konsantrasyon diferan)
Analiz retou annaryè inite probabilist te montre ke 95% LOD detèmine pa tès la MIRA-LFS te 0. 147CFU/reyaksyon.
(Limit kalkil deteksyon)
2. Validasyon espesifik
Te selectivite a nan deteksyon miRA-LFS detèmine pa analize 18 tansyon nan komen mikwo-òganis patojèn ak 15 tansyon nan klinik staphylococcus emolyticus. Rezilta yo te montre ke tès la MIRA-LFS te negatif pou tout 18 lòt bakteri patojèn, ak pozitif pou 15 verifye echantiyon klinik nan Staphylococcus haemolyticus.
(8 tansyon nan bakteri patojèn estanda ak 15 tansyon nan streptococcus emolitik klinik yo te teste, respektivman)
Essay a MIRA-LFS gen gwo selectivite ak se apwopriye pou tès depistaj la nan Staphylococcus emolyticus.
3. Tès echantiyon aktyèl
Yon total de 95 echantiyon yo te ranmase owaza nan lopital Lianyungang Dezyèm Pèp la, ki gen ladan 35 echantiyon nan po ak tisi mou, 16 echantiyon nan pipi, 14 echantiyon nan krache ak 30 echantiyon nan san.
(95 echantiyon klinik yo te teste pa diferan metòd)
Rezilta yo te montre ke metòd deteksyon an te 100% ki konsistan avèk metòd QPCR la. Anplis de sa, konpare ak estanda an lò (GB/T4789. Rezilta sa yo pli lwen valide posibilite teknik nan metòd la nan deteksyon an nan Staphylococcus emolyticus nan echantiyon klinik yo.
Se metòd la MIRA-LFS itilize pou deteksyon an rapid nan Staphylococcus emolyticus pa POCT, ki se efikas, egzat, senp, ak pri-efikas, ki se itil pou dyagnostik rapid ak desizyon tretman.