Enfeksyon respiratwa egi yo se maladi respiratwa komen nan timoun yo, souvan ki te koze pa viris yo. Viris respiratwa syncytial (RSV) ak adenovirus respiratwa (ADV) se de ajan patojèn ki lakòz enfeksyon respiratwa egi nan timoun yo. Ka modere ka lakòz sentòm komen frèt tankou tous ak nen k ap koule, pandan y ap ka grav ka lakòz konplikasyon grav tankou nemoni ak otit medya yo. Dapre rekòmandasyon yo nan, ganizasyon Mondyal Lasante, deteksyon an nan ajan patojèn bezwen yo dwe vit, egzat, sansib, ak espesifik epi yo pa ta dwe konte sou teknisyen espesyalize oswa enstriman mizik gwo. Se poutèt sa, li se patikilyèman enpòtan yo devlope yon metòd deteksyon pou RSV ak ADV ki ka satisfè kondisyon ki pi wo a deteksyon.
Gwoup rechèch la nan Direktè Ma Dongli nan Enstiti a nan Pedyatri nan Shenzhen Lopital Timoun yo pibliye yon atik "Yon multiplex recombinase polymerase anplifikasyon tès konbine avèk CRISPR/ CAS12A pou deteksyon an nan viris syncytial respiratwa ak respiratwa adenovirus" nan jounal la "Syantifik Rapò Viris ak yon Factor Factor nan.
Rechèch BECA
Multi-anzim izotèrmik rapid asid asid anplifikasyon teknoloji MIRA konbine avèk sistèm deteksyon CRISPR/CAS la. Pa konsepsyon prime MIRA ak CRISPR RNAs (CRRNAs), fè konparezon sekans miltip, optimize kondisyon reyaksyon, ak lè l sèvi avèk fluoresans aparèy deteksyon nimerik verifye sansiblite ak espesifik.
Ak lè l sèvi avèk rezilta yo qPCR kòm yon kontwòl konparezon, yo te konsistans nan rezilta tès la nan 160 echantiyon gòj klinik echantiyon yo te etidye.
Rezilta eksperimantal yo
1. sansiblite ak espesifik nan metòd deteksyon MIRA-CRISPR/CAS12A
Nan deteksyon an metòd MIRA, se RSV-F1/R1 pè a premye itilize yo anplifye asid nikleyik soti nan echantiyon prelèvman gòj nan RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, FLUB, HMPV, FLUA, oswa RSV/pasyan ko-enfekte. Eksepte pou RSV ak ADV, ki te anplifye Gwoup Mizik, lòt rezilta yo te negatif, ki endike ke prime yo MIRA chwazi pa t 'kwa-reyaji ak lòt uit ajan patojèn yo teste epi yo te byen konsève.
Imedyatman, RSV a ak ADV plasmid recombinant yo te dilye 10times lè l sèvi avèk dlo esteril, ak limit yo deteksyon pou RSV ak ADV yo te tou de 106Kopi/ml.
(1-10: echantiyon prelèvman gòj nan pasyan ki gen RSV, RSV/ADV ko-enfeksyon, ak lòt echantiyon patojèn respiratwa respektivman)
2. Konpare ak qPCR
Konpare ak metòd la qPCR, limit yo deteksyon nan RSV ak ADV yo tou de 103 kopi/ml
(Sansiblite nan deteksyon qPCR nan RSV ak ADV)
Metòd la Mira-Crispr se pi apwopriye pou laboratwa de baz yo, ak tan deteksyon kout, operasyon senp, epi pa gen okenn bezwen pou gwo-echèl enstriman qPCR ranpli operasyon eksperimantal.
3. Konparezon nan echantiyon klinik yo
Yo te ranmase echantiyon prelèvman nan gòj nan 160 timoun ki gen enfeksyon respiratwa egi. An menm tan an, yo te itilize metòd MIRA-CRISPR ak metòd QPCR pou deteksyon, ak rezilta yo te konpare ak rezilta esè klinik yo.
Konpare ak metòd la qPCR, sansiblite a nan metòd la miRA-CRISPR pou RSV ak ADV yo te 98.1% ak 91.4% respektivman, ak espesifik nan deteksyon te 1 0 0%. Valè kappa a pi gran pase 0.95, ki endike yon wo degre de konsistans.
Metòd la Mira-Crispr gen avantaj ki genyen nan deteksyon rapid, sansib ak espesifik nan RSV ak ADV. Li ka detekte enfeksyon viral san pèdi tan epi avèk presizyon, epi li pi apwopriye pou itilize nan zòn ki gen resous medikal ra.