Deteksyon vizib ak rapid nan chaphamaparvovirus felin lè l sèvi avèk anplifikasyon rapid izotèmik multienzyme ak tès dipstick koule lateral
Jounal:Fwontyè nan mikrobyoloji selilè ak enfeksyon
Faktè enpak:4.6
Chaphamaparvovirus felin(FeChPV)se yon parvoviris roman, premye detekte nan chat dyare nan Kanada an 2019. Patojèn li yo ak karakteristik molekilè yo rete klè, epi li montre divèsite lame ak jenetik, ki mande plis envestigasyon epidemyolojik. Kounye a, pa gen okenn metòd ofisyèl pou deteksyon FeChPV.
Metòd miltienzyme izotèmal anplifikasyon rapid-dipstick koule lateral (MIRA-LFD)te itilize avèk siksè pou detekte divès viris, ofri avantaj tankou rapidite, senplisite, epi pa bezwen enstriman presizyon. Ekip rechèch la te etabli yon metòd MIRA-LFD ki apwopriye pou FeChPV pou adrese defi nan deteksyon klinik de baz yo. San konte sou enstriman presizyon,metòd MIRA-LFD te konplete deteksyon FeChPV a 37 degre nan 20 minit epi li pa te montre okenn reyaksyon kwa- ak lòt viris. Limit deteksyon an te 32.3 kopi / μL,10 fwa pi wo pase metòd PCR la. Anplis de sa, metòd MIRA-LFD a te detekte 29 FeChPV-echantiyon pozitif nan mitan 417 chat dyare, ak yon pousantaj pozitivite yon ti kras pi wo pase metòd PCR enbrike la. Rezilta sa yo endike ke metòd MIRA-LFD etabli pou detekte FeChPV se yon metòd efikas, ekonomik, serye ak senp, ki kontribye nan prevansyon ak kontwòl bonè nan enfeksyon FeChPV.
1.Metòd eksperimantal
Echantiyon klinik:Echantiyon prelèvman rektal yo itilize nan etid sa a yo te kolekte nan 632 chat (ki gen ladan 417 ki gen dyare ak 115 chat ki an sante) ak 474 chen (ki gen ladan 342 ki gen dyare ak 132 chen ki an sante) nan klinik veterinè nan Guangdong, Henan, Anhui, pwovens Zhejiang ak Rejyon Otonòm Inner 20222222222222.
Anplifikasyon asid nikleik:Ekstrè asid nikleyik ADN te ajoute nan sistèm MIRA a. Recombinase ak primè te fòme yon konplèks; avèk èd pwoteyin oksilyè ak pwoteyin ki gen yon sèl-seksyon, yo anvayi modèl ADN doub-. Primè mare nan rejyon konplemantè omològ pou fòme yon rejyon bouk D-, pandan recombinase la demonte nan konplèks la. Polymerase mare nan fen 3' nan primè yo ak inisye sentèz ADN, eksponansyèlman anplifye rejyon sib la sou modèl la. Pwosesis sa a sikile rapidman ak efikasman, kidonk li te reyalize ultra-anplifikasyon fragman sib la nan jis 15 minit.
Devlopman koulè bann tès:Pwodwi anplifikasyon asid nikleyik la te dilye 1:10, aplike nan teren tès la, epi rezilta yo te li apre 5 minit.
Tout pwosesis la soti nan anplifikasyon asid nikleyik nan devlopman koulè teren tès te pran sèlman 20 minit.
Amp-pwodwi Byolojik lavni yo te itilize nan eksperyans la:
Nan etid la, yo te egzamine kat ansanm espesifik -konbinezon sond yo. Yo te itilize tou de elektwoforèz jèl agaroz ak bann tès asid nikleyik pou prezantasyon rezilta yo. Tout kat konbinezon sond-jadendanfan yo kapab detekte viris FeChPV la. Dapre rezilta elektwoforèz jèl agarose, konbinezon FeChPV-4 te montre gwoup sib ki pi klere, kidonk konbinezon sa a te chwazi pou tès ki vin apre yo.
Dapre rezilta elektwoforèz jèl agaroz la, anplifikasyon pou 5, 10, 15, ak 20 minit tout bay gwoup sib la. Entansite gwoup sib la pik nan 15 minit anplifikasyon, etabli 15 minit kòm tan reyaksyon pi bon pou tès sa a. Anplifikasyon nan 36 degre, 37 degre, 38 degre, 39 degre, ak 40 degre tout pwodwi bann sib la, ak gwoup la pi klere obsève nan 39 degre, etabli 39 degre kòm tanperati a reyaksyon pi bon pou tès sa a.
(Figi A: 1: Anplifikasyon 5min; 2: Anplifikasyon 10min; 3: Anplifikasyon 15min; 4: Anplifikasyon 20min) (Figi B: 1: Anplifikasyon 36 degre; 2: Anplifikasyon 37 degre; 3: Anplifikasyon 38 degre; 4: Anplifikasyon 394 degre; )
2.Deteksyon Pèfòmans
Sansiblite:
(Figi A: rezilta MIRA yo prezante lè l sèvi avèk elektwoforèz jèl agarose)
(Figi B: Rezilta PCR nich yo prezante lè l sèvi avèk elektwoforèz jèl agaroz)
(Figi C: rezilta MIRA yo prezante lè l sèvi avèk bann tès asid nikleyik)
Echantiyon yo te sibi 10-pliye dilusyon seri kòmanse soti nan 3.23 × 10⁶ kopi / μL. Nich PCR ak elektwoforèz jèl agarose te kapab detekte stab 3.23 × 10² kopi / μL; MIRA ak elektwoforèz jèl agaroz ak MIRA ak bann tès asid nikleyik te kapab tou de detekte stab 3.23 × 10¹ kopi / μL.
Metòd MIRA a te montre sansiblite konsistan lè l sèvi avèk de fòma prezantasyon rezilta diferan, ak sansiblite metòd MIRA a te pi wo pase PCR enbrike.
Espesifik:
(1: FeChPV, chaphamaparvovirus felin; 2: FPV, viris panleukopenia felin; 3: FeAstV, astrovirus felin; 4: FBoV, bocavirus felin; 5: CachaV, chaparvovirus canine; 6: kontwòl negatif)
Metòd MIRA-LFD ki fèk etabli a te detekte sèlman FeChPV epi li pa montre okenn reyaktif kwa-ak lòt viris referans yo, sa ki endike yon bon espesifik.
3.Rezime etid
Etid sa a te etabli yon metòd MIRA-LFD pou detekte FeChPV san yo pa bezwen enstriman gwo-presizyon. Kòm yon metòd deteksyon efikas, ekonomik ak serye ak sansiblite segondè ak espesifik, metòd MIRA-LFD a pi apwopriye pou deteksyon klinik, bay sipò teknik pou prevansyon ak kontwòl bonè nan enfeksyon FeChPV.
4.AMP-FINI BIOTECH
MIRA multienzyme isothermal rapid anplifikasyon asid nikleyik se yon teknoloji ki vrèman pèmèt sou -deteksyon rapid sou sit.
Teknoloji MIRA baze sou mekanis reparasyon rekonbinasyon jèn in vivo, li konte sou aksyon sinèrjetik plizyè pwoteyin fonksyonèl nan tanperati chanm pou reyalize anplifikasyon asid nikleyik rapid (5-20 min), sansib, espesifik ak san danje nan tanperati chanm (25 degre -45 degre). Akòz nati izotèmik teknoloji MIRA, li gen kondisyon ekipman ki ba ak operasyon senp. Atravè aparèy pòtab miniaturize, li ka aplike nan tès premye liy atravè divès senaryo aplikasyon, pote tès asid nikleyik rapid ak egzak nan anviwònman tankou POCT, tès kay, jaden agrikòl, ak sou plas anfòsman lalwa. Ki baze sou teknoloji MIRA, Amp-future Biotech te devlope yon seri de pwodwi tès rapid sou sit-, ki gen ladan ajan rapid lage asid nikleyik, reyaktif izotèmik rapid anplifikasyon asid nikleyik, bann tès koloidal lò, ak ekipman pòtab miniaturize, kreye yon solisyon jeneral pou tès molekilè rapid sou-sou sit. Anplis de sa, teknoloji MIRA Amp-future a ofri avantaj aplikasyon lè yo konbine avèk teknoloji CRISPR, NGS, SNP, mikrofluidik, ak plis ankò.
Anplis de seri de pwodwi tès rapid sou sit-yo montre pi wo a, Amp-avni Biotech bay tou:
Reyaktif rechèch:Bay reyaktif matyè premyè ak sipò teknik pou rechèch syantifik debaz, osi byen ke referans literati pwojè.
Pwodiksyon OEM:Kapab pwodwi poukont yo pwodwi gwo-pite, gwo-aktivite fini pandan tout pwosesis la, reyalize pwodiksyon endistriyèl-echèl.
Pwojè Devlopman Komisyone:Enfòmasyon sou sekans ak rezilta analiz aliyman sekans yo, premye pwojè -konsepsyon ak sentèz sond, sentèz plasmid pwojè ak echantiyon, rapò pwojè ak rezilta, elatriye.
Pou plis enfòmasyon, akeyi yo mande.