Molekilè teknoloji dyagnostik jodi a ap en nan yon vitès san parèy, ak pwogrè siyifikatif sou de ane ki sot pase yo. Pami yo, teknoloji anplifikasyon izotèrmik te vin plis atansyon akòz kapasite yo nan fè anplifikasyon san yo pa bezwen an pou ekipman espesyalize. Plizyè byen li te ye metòd anplifikasyon izotèrmik egziste, tankou lanp, RPA, ak RAA. Sepandan, jodi a mwen vle prezante yon plus izotèrmik izotèrmik teknoloji-Mira.
Pou asire tout moun gen yon konpreyansyon ki konsistan nan konsèp kle yo, isit la yo se kèk eksplikasyon tèm:
- Recombinase polymerase anplifikasyon (RPA): Sa a se yon teknoloji anplifikasyon recombinase-medyatè.
-Recombinase-Aided anplifikasyon (RAA): yon menm jan recombinase-medyatè metòd anplifikasyon.
- Loop-medyatè anplifikasyon izotèrmik (lanp): yon lòt teknik anplifikasyon izotèrmik.
- Multienzim izotèrmik rapid anplifikasyon (MIRA): yon nouvo izotèrmik rapid teknoloji anplifikasyon.
Rezime rapid ak klarifikasyon:
Anpil ta ka mande ki nan sa yo divès kalite metòd anplifikasyon izotèrmik se plis serye ak ki estab. An reyalite, chak teknoloji gen fòs ak limit li yo. Sepandan, faktè kle yo pou adopsyon siksè yo se kapasite nan echèl pwodiksyon fiable, pri ki ba, ak pèfòmans gaya nan tout aplikasyon pou divès.
Mwen pral kounye a yon ti tan analize chak teknoloji ki baze sou sa mwen konnen:
Lanp (bouk-medyatè anplifikasyon izotèrmik):
Anpil nan jaden an konnen ke lanp soti nan Japon, devlope pa Dr Notomi nan 2000 kòm yon teknik jèn anplifikasyon roman. Kounye a, pwopriyetè a nan teknoloji sa a ki dwe nan konpayi an Japonè Eiken Chemical co, Ltd.
Avantaj:
- segondè sansiblite (2-5 lòd nan grandè pi wo pase metòd tradisyonèl PCR).
- Kout tan reyaksyon (reyaksyon ka ranpli nan 30-60 minit).
- Pa bezwen pou enstriman espesyal nan itilizasyon klinik (menm si yo rekòmande yon turbidimètr an tan reyèl pandan devlopman twous).
- Fasil yo opere (si detekte ADN oswa RNA, pwosesis la enplike nan melanje solisyon an reyaksyon, anzim, ak modèl nan yon tib reyaksyon, Lè sa a, enkubasyon nan sou 63 degre pou 30-60 minit nan yon beny dlo oswa enkibatè, ak rezilta yo obsève pa je a toutouni).
Dezavantaj:
- Segondè sansiblite ka rezilta nan kontaminasyon aerosol yon fwa tib la louvri, fè li inoporten pou itilize deyò nan yon laboratwa PCR akòz yon gwo risk pou yo fo positifs.
- Jadendanfan konsepsyon se difisil, fè li inoporten pou kèk maladi, espesyalman sa yo ki te koze pa viris ki gen kèk sekans komen.
- Aplikasyon li se relativman limite.
RPA ak RAA teknoloji izotèrmik anplifikasyon:
De metòd sa yo se lajman omolog, ak diferans lan prensipal yo te sous la nan recombinase a itilize yo.
- recombinase RPA a soti nan bakteriofaj T4 la.
- Recombinase RAA a sòti nan bakteri oswa fongis.
Pwen kle nan k ap travay prensip:
1. Nan prezans ATP, recombinase a mare nan prime, fòme yon konplèks pwoteyin-nikleyè, ki Lè sa a, rechèch pou matche ADN sib.
2. Yon fwa ke Jadendanfan an jwenn modèl ADN matche a, idroliz ATP bay enèji pou recombinase pou kite Jadendanfan an, ak ADN polymerase sentèz yon nouvo ADN seksyon.
3. An menm tan an, yon sèl-bloke ADN-obligatwa pwoteyin (SSB) mare nan ADN nan deplase deplase yo anpeche refòm nan doub-Strand la.
Avantaj:
- Reyaksyon RPA/RAA a trè vit, ak rezilta ki ka reyalize nan apeprè 30 minit.
- sansiblite ka rive jwenn 10 kopi/μl.
- Pa gen bezwen pou ekipman konplèks pandan anplifikasyon.
-Pli lwen devlopman nan pwofonde ki baze sou oswa koloidal lò metòd kwomatografi anpil senplifye entèpretasyon rezilta, fè yo byen adapte pou itilize nan resous-limite oswa ekonomikman ki defavorize zòn.
Dezavantaj:
- RPA se yon teknoloji devlope pa konpayi Britanik TwistDX a, ki se kounye a ki posede pa Abbott, sa ki lakòz depans segondè, sik ekipman pou lontan, ak mank de sipò teknik. Sa fè aplikasyon gwo-echèl ak pwodiksyon an mas difisil nan Lachin.
- RAA se yon teknoloji piman domestik, men li manke estabilite an tèm de rezistans entèferans ak konsistans reyaktif pwodwi. Anplis, pwosesis manifakti a pou anzim fonksyonèl bezwen amelyorasyon. Menm si teknoloji a te sou mache a pou senk ane, li pa gen ankò yo te lajman adopte akòz estabilite ak pwoblèm adaptabilite.
- Tou de RPA ak RAA mande pou prime ki 30-35 BP nan longè. Pi kout prime afekte espesifik, sansiblite, ak vitès anplifikasyon, fè konsepsyon Jadendanfan defi.
MIRA (miltienzim izotèrmik rapid anplifikasyon):
MIRA se yon roman teknoloji anplifikasyon izotèrmik prezante nan mitan -2019. Li omolog pou RPA ak RAA.
Malgre ke Mira pataje resanblans ak RPA ak RAA an tèm de prensip k ap travay, gen diferans enpòtan nan seleksyon anzim, kiltivasyon, pou pirifye, ak lòt aspè nan gwo-echèl pwodiksyon. Anplis, ekip teknik la dèyè pwomotè Mira a, ampfuture, te pase prèske 11 ane pafè teknoloji a. Li se kounye a konplètman ekipe sipòte devlopman nan pare-a-itilize reyaktif, devlopman koutim, pwojè rechèch, ak lòt sèvis customizable.
Avantaj:
1. Pwoteyin fonksyonèl yo nan reyaktif MIRA yo souse nan anzim divès kalite, ak kèk anzim sibi modifikasyon vize amelyore efikasite nan sistèm nan anzim debaz, ki kapab lakòz yon sistèm pi konplè.
2. Rezistans fò entèferans ak estabilite. Reyaktif yo Mira sibi anpil optimize an tèm de seleksyon kofakteur ak konsantrasyon, ansanm ak friz-siye pwosesis pwodiksyon, fè yo plis rezistan a entèferans ak plis ki estab.
3. Pèrsonalizasyon ak adaptabilite. Akòz kontwòl konplè sou pwodiksyon an nan pwoteyin fonksyonèl ak yon konpreyansyon gwo twou san fon nan teknoloji a, MIRA ka adapte a aplikasyon pou divès kalite, ofri diferan sistèm reyaktif ak sèvis pèsonalize pèsonalize.
4. Patant propriétaires. Depi Mira se 100% domestik devlope, pa gen okenn risk pou yo kontravansyon patant pandan devlopman pwodwi. Sa a bay Mira yon avantaj konpetitif tou de nan mache yo domestik ak entènasyonal yo.
5. Yon pwotokòl pwodiksyon konplè te etabli, sa ki pèmèt pou pwodiksyon ki estab gwo-echèl.
Dezavantaj:
1. Rekonesans mache a toujou ba, ak plis done ak referans nan jaden diferan (tankou pousantaj pozitif nan diferan zòn) yo bezwen jwenn pi laj akseptasyon.
2. Design Jadendanfan toujou swiv karakteristik sa yo nan RPA oswa RAA, ki egzije pi long Jadendanfan oswa sekans pwofonde, ki ka pa fasilite yon switch rapid pou itilizatè PCR aktyèl.